Informace o soupravě:

·         Použitý antigen:

Skupina 1 (ANA): Jo-1, PL-7, PL-12, EJ, OJ, KS, YARS, ZoA, ZoB, HMGCR, SAE-1, SAE-2, SRP54, Mi-2, TIF1γ, MDA5, NXP2, PmScl 75, PmScl 100, CENP A, CENP B, Scl-70, POLR3A, NOR90, PDGFR-β, Fibrillarin, Th/To, Ro52, Ro60, La, SmB, SmD, RNP A, RNP C, RNP 68/70, P0, Ku, Nucleolin, dsDNA, Histon, Nukleozom, PCNA. Doplňkové antigeny: M2, DFS70.

Skupina 2 (Myozitidy): Jo-1, PL-7, PL-12, EJ, OJ, KS, YARS, ZoA, ZoB, HMGCR, SAE-1, SAE-2, SRP54, Mi-2, TIF1γ, MDA5, NXP2. Doplňkové antigeny: Ro52, PmScl 75, PmScl 100, Ku.

Skupina 3 (Sklerodermie): CENP A, CENP B, Scl-70, POLR3A, NOR90, PDGFR-β, Fibrillarin, Th/To, PmScl 75, PmScl 100, RNP A, RNP C, RNP 68/70. Doplňkové antigeny: Ro52, Ku, M2.

Skupina 4 (SLE a další onemocnění pojiva): dsDNA, Histon, Nukleozom, PCNA, SmB, SmD, RNP A, RNP C, RNP 68/70, P0, Ku, Nucleolin, Ro52, Ro60, La, NOR90.

·         Antigeny jsou naneseny formou mikroteček (spotů) v tripletech na nitrocelulózovou membránu ve formátu mikrotitrační jamky.

·         V případě přítomnosti specifických protilátek dochází k jejich vazbě na jednotlivé separované antigeny.

·         V následujících krocích jsou navázané protilátky označeny Konjugátem a detekovány barevnou reakcí se Substrátovým roztokem (BCIP/NBT).

·         Souprava umožňuje 96 testů.

·         Krátké inkubační doby, celková doba vyšetření je asi 1,5 hod.

·         Každý jednotlivý test obsahuje kontrolní spoty, které slouží ke kontrole funkčnosti a citlivosti soupravy, a dále spoty pro kontrolu přítomnosti příslušného konjugátu.

·         Soupravy obsahují pozitivní kontrolu umožňující validaci testů.

·         Pro kvantitativní vyhodnocení obsahují jamky kalibrační spoty.

·         Všechny roztoky jsou dodávány v pracovním ředění.

·         Možnost postupného zpracování souprav, roztoky jsou v dostatečném nadbytku.

·         Vyhodnocení pomocí Microblot-Array readeru a příslušného softwaru.

Využití:

·         Konfirmační test ELISA či jiných screeningových vyšetření.

·         Identifikace jednotlivých typů protilátek, rozlišení jednotlivých systémových autoimunitních onemocnění.

Stručný pracovní postup:

1.       Ředění vzorků sér a plazem (1:51).

2.       Pipetování ředěných vzorků.

3.       Inkubace 30 min při laboratorní teplotě.

4.       Promytí 3 × 5 min.

5.       Dávkování Konjugátu.

6.       Inkubace 30 min při laboratorní teplotě.

7.       Promytí 3 × 5 min.

8.       Dávkování substrátu (BCIP/NPT).

9.       Inkubace 15 min při laboratorní teplotě.

10.   Promytí 2 × 5 min v destilované vodě.

11.   Vysušení a vyhodnocení testu.